Hinweise zu Gewinnung, Verarbeitung, Lagerung und Versand von Proben für die mikroskopische Diagnose von parasitären Infektionen

Blut

Plasmodium-Spezies

Dicke und dünne Ausstriche von Kapillarblut (d. h. Finger oder Ohrläppchen, mit einer Einweglanzette) oder 5–10 ml frisches antikoaguliertes Blut (vorzugsweise in Sammelröhrchen, die EDTA enthalten)

Mehrerer Proben sollten während einer akuten Erkrankung gesammelt werden.

Abstriche von Kapillar-oder antikoaguliertem Blut sollten innerhalb von 3 Stunden nach der Entnahme präpariert werden.

Geeignete Färbungen sind Wright- oder Giemsa-Färbung.

Objektträger müssen sauber und fettfrei sein.

Babesia-Spezies

Dicke und dünne Blutausstriche wie für Plasmodium-Spezies

Sammeln wie bei Plasmodium-Spezies.

Geeignete Färbungen sind Wright- oder Giemsa-Färbung.

Die Morphologie ähnelt den Ringformen von Plasmodium-Spezies, jedoch ohne Pigment und Gametozyten. Sporen sind symptomatisch für Babesia-Spezies, kommen aber selten vor.

Dickflüssige Blutausstriche können schwierig zu interpretieren sein und sollten nur von einem erfahrenen Mikroskopiker durchgeführt werden. Auf einem Blutausstrich kann ein „Malteser-Kreuz“-Muster zu sehen sein.

Filarienwürmer

Dicke und dünne Ausstriche von 1 ml antikoaguliertem Blut; wenn die erste Probe negativ ist, 5–10 ml gewinnen, konzentriert durch Zentrifugation oder Filtration

Microfilariae von Wuchereria bancrofti und Brugia malayi: Blutabnahme zwischen 22:00 und 2:00 Uhr.

Mikrofilarien von Loa loa, Dipetalonema perstans, und Mansonella ozzardi: Entnehmen Sie Blut zwischen 10 und 18 Uhr.

Filarien weisen eine tageszeitliche Periodizität auf, und zur Optimierung der Ausbeute müssen die Proben innerhalb bestimmter Zeiträume gewonnen werden.

Verwenden Sie Giemsa- oder Hämatoxylin-Eosin-Färbung direkt oder, für eine größere Empfindlichkeit, nach der Konzentration in 2% Formalin (Knott-Technik) oder nach Filtration durch eine Nucleopore-Membran.

Trypanosoma-Spezies

Dünne Abstriche von Kapillarblut oder 5–6 ml von antikoaguliertem Blut

Kapillarblut oder antikoaguliertes Blut wird gesammelt. Abstrich auf Glasplättchen.

Verschiedene Anreicherungstechniken werden verwendet, um die Sensitivität zu verbessern.

Motile Trypanosomen sind in nassen Zubereitungen zu sehen; Giemsa- (oder Feld) Färbung wird verwendet, um sie in festen Vorbereitungen zu identifizieren.

Knochenmark, andere retikuloendothelialen Gewebe oder Liquor

Leishmania-Spezies (viszerale Leishmaniose)

Aspirate von Knochenmark, Milz, Leber oder Lymphknoten oder Abstriche vom Buffy Coat

Ausstrich auf Objektträger.

Verwenden Sie Giemsa-, Wright-Giemsa oder Hämatoxylin-Eosin-Färbung.

Naegleria

Acanthamoeba

Balamuthia

Frisches Liquor

Aseptische Abnahmetechniken sind erforderlich.

Proben sollten so schnell wie möglich untersucht werden.

Die Untersuchung sollte mittels Licht oder Phasenkontrastmikroskopie erfolgen.

Parasiten können durch ihre Bewegungen erkannt werden; sie können mit Giemsa fixiert und gefärbt oder kultiviert werden.

Trypanosoma brucei rhodesiense

Trypanosoma brucei gambiense

Aspirate von Lymphknoten oder Schanker

Frisches Liquor

Aseptische Abnahmetechniken sind erforderlich.

Verwenden Sie Nativpräparate, um bewegliche Parasiten zu identifizieren, oder fixieren und färben Sie sie mit Giemsa- oder Field-Färbung vor oder nach der Konzentration durch Zentrifugation.

Duodenalaspirate oder jejunal Biopsie

Giardia-Spezies

Cryptosporidium-Spezies

Cystoisospora-Spezies

Cyclospora-Spezies

Mikrosporidien

Strongyloides-Spezies

Duodenalaspirate oder jejunale Biopsieprobe während der Endoskopie

Untersuchen Sie Aspirationen sofort oder fixieren und färben Sie.

Führen Sie eine histopathologische Untersuchung von Biopsien durch.

Verwenden Sie eine feuchte Aspirathalterung, um die Eizellen oder Strongyloides-Larven zu identifizieren. Für die Diagnose können mehrere Färbungen verwendet werden (siehe Kot unten für Details).

Die Transmissionselektronenmikroskopie war die primäre Methode zum Nachweis und zur Speziesidentifikation von Mikrosporidien.

Rektale Biopsie

Schistosoma mansoni

Schistosoma japonicum

Rektale Biopsieproben von der Dorsalfalte, ca. 9 cm vom Anus

Für die histopathologische Untersuchung sollte ein Segment fixiert und für eine erhöhte Sensibilität zwischen die Objektträger gedrückt werden.

Die Differenzierung basiert auf der Morphologie der Wurmeier.

Sigmoidoskopie (Darmspiegelung)

Entamoeba histolytica

Frische Abstriche mit einer Kürette oder einem Volkmann-Löffel, Schleimhautbiopsie oder Aspiration aus einer Läsion mittels einer 1-ml-Pipette mit einem Gummiball (Wattestäbchen sind nicht zufriedenstellend)

Untersuchen Sie die Probe sofort oder nach der Fixierung und Färbung.

Verwenden Sie Nativpräparate oder fixierte gefärbte Objektträger (z. B. mit Trichrom-Färbung) zum Nachweis von Trophozoiten und Zysten. Stuhl sollte auf E. histolytica-Antigen oder -DNA untersucht werden; diese Tests sind empfindlicher und können E. histolytica von E. dispar und anderen nicht-pathogenen Amöben unterscheiden.

Stuhl

Cryptosporidium-Spezies

Stuhluntersuchung auf Eier und Parasiten in mehreren frisch ausgeschiedenen Stuhlproben (≥ 3), täglich oder jeden zweiten Tag gesammelt

Frische Proben müssen gekühlt und untersucht werden oder in Formalin oder einem anderen Fixiermittel konserviert werden.

Sie müssen mit Vorsicht behandelt werden, da frische und mit Dichromat konservierte Stühle infektiös sind.

Duodenalaspirate oder jejunal Biopsie können diagnostisch sein.

Nativpräparate sollen mit Licht-, Differenzialinterferenzkontrast-, Phasenkontrast- und Immunfluoreszenzmikroskopie untersucht werden.

Proben sollten mit modifiziertem säurefester oder modifizierter Safranin-Färbung angefärbt werden.

Assays für fäkale Antigene oder DNA sind sensitiver.

Cyclospora-Spezies

Untersuchung von Stuhl auf Eier und Parasiten in mehrfachen, frisch ausgeschiedenen Stuhlproben, täglich oder jeden zweiten Tag gesammelt

Die Proben sollten gekühlt und frisch oder gefroren untersucht oder in 10% Formalin und 2,5% Kaliumdichromat konserviert werden. Verschiedene Labortests erfordern unterschiedliche Konservierungstechniken. Anreicherungstechniken erhöhen die Sensitivität.

Nativpräparate sollen mit Licht-, Hellfeld-Differenzial-Interferenz-Kontrast-, Phasenkontrast und/oder UV-Fluoreszenzmikroskopie untersucht werden. Oozysten sind unter UV-Licht autofluoreszierend. Fixierte Proben können mit modifizierter Säure-Fast- oder modifizierter Safranin-Färbung angefärbt werden.

Ein Sporulationsassay kann Cyclospora von blaugrünen Algen unterscheiden.

Assays für DNA im Stuhl sind spezifisch und sensitiver.

Cystoisospora-Spezies

Untersuchung von Stuhl auf Eier und Parasiten in mehrfachen, frisch ausgeschiedenen Stuhlproben, täglich oder jeden zweiten Tag gesammelt

Untersuchen Sie frisch oder konservieren Sie in Formalin oder einem anderen Fixateur. Anreicherungstechniken steigern die Sensitivität.

Oozysten können in Nativpräparaten durch Hellfeld-Differenzial-Interferenz-Kontrast oder Epifluoreszenzmikroskopie visualisiert werden.

Fixierte Proben sollen mit modifizierter säurefester Farbe gefärbt werden.

Wenn der Stuhlgang negativ ist, kann die Untersuchung des Zwölffingerdarmaspirats oder einer Biopsie diagnostisch sein.

Entamoeba dispar

Entamoeba histolytica

Andere Amöben

Mehrere Proben von frisch ausgeschiedenem Stuhl (≥ 3), entnommen am Vormittag

Proben von ungeformten oder flüssigem Stuhl müssen innerhalb von 15 Minuten untersucht werden.

Geformter Stuhl muss bis zur Untersuchung gekühlt werden. Konservierung in Formalin oder einem anderen Fixiermittel.

Bei Zysten sollen Nativpräparate und permanent gefärbten Objektträger (z. B. Trichromfärbung) sowie Anreicherungstechniken verwendet werden.

Stuhl sollte auf E. histolytica-Antigen oder -DNA untersucht werden; diese Tests sind empfindlicher und können E. histolytica von E. dispar und anderen nicht-pathogenen Amöben unterscheiden.

Enterobius-Spezies

Wurmeier sollten aus dem Bereich um den Anus auf einem Tesastreifen gewonnen und auf Glasobjektträger gelegt werden.

Routinemäßige Stuhluntersuchung auf Eier und Parasiten (O&P) in mehreren frisch ausgeschiedenen Stuhlproben, täglich oder jeden zweiten Tag gesammelt

Gewinnung um den Bereich des Anus morgens vor dem Stuhlgang oder dem Bad.

Enterobius-Eier werden gelegentlich in einer Stuhlprobe oder in einer zervikalen oder vaginalen Probe gesehen (z. B. als Zufallsbefund bei einem Papanicolaou [Pap]-Test).

Adulte Würmer können bei der Untersuchung der Perianalregion oder der Vagina beobachtet werden.

Giardia-Spezies

Mehrere Proben von frisch ausgeschiedenem Stuhl (≥ 3), entnommen jeden zweiten Tag am Vormittag

Aspirate aus dem Duodenum, die mittels oberer gastrointestinaler Endoskopie zum Nachweis von Trophozoiten gewonnen wurden

Untersuchen Sie frisch oder konservieren Sie in Formalin oder einem anderen Fixateur.

Untersuchen sie direkte und konzentrierte Proben.

Zysten werden normalerweise in Nativpräparaten beobachtet und Trophozoiten werden in fixierten, Trichrom-gefärbten Objektträgern gesehen.

Assays für fäkale Antigene oder DNA sind sensitiver.

Mikrosporidien

Mehrere Stuhlproben sollten täglich oder jeden zweiten Tag gesammelt werden.

Dünndarmbiopsien können notwendig sein, wenn Stuhlproben negativ sind.

Proben, die mit Chromotropsäure-Methoden gefärbt werden, werden am häufigsten verwendet. Chemofluoreszierende Substanzen wie Calcifluor können auch zur schnellen Identifizierung verwendet werden.

Elektronenmikroskopie ist die sensitivste Methode und wird zur Differenzierung eingesetzt.

Für einige Spezies sind Assays für DNA im Stuhl oder Gewebe verfügbar.

Zestoden (Bandwürmer)

Nematoden (Rundwürmer)

Ascaris

Hakenwürmer

Strongyloides

Trichuris

Trematoden (Egel)

Sonstige

Multiple gesammelte Stuhlproben (bis zu 7 werden für Strongyloides benötigt)

Probe kühl lagern und frisch untersuchen oder in 10% igem Formalin fixieren und mit Formalin-Ethylacetat-Sedimentation konzentrieren.

Aktive Larven werden mit Strongyloides gesehen, Eizellen mit anderen Darmhelminthen.

Wenn der Stuhl bei Umgebungstemperatur gehalten wird, können Hakenwurmeizellen schlüpfen und Larven freisetzen, die von Strongyloides-Larven unterschieden werden müssen.

Wenn der Verdacht auf Strongyloides besteht und die direkte Untersuchung negativ ist, sollte ≥ 1 der folgenden spezialisierten Stuhltests durchgeführt werden:

• Formalin-Ethylacetat-Konzentrationsverfahren

• Larvennachweis mittels Baermann-Trichter-Methode

• Kultur nach der Harada-Mori-Filterplattenmethode

• Agarplattenkultur

Sputum oder Aspirate von Atemwegen

Paragonimus-Spezies

Frisches Sputum

Proben sollten so schnell wie möglich untersucht oder für eine spätere Untersuchung konserviert werden.

Anreicherungstechniken können notwendig sein.

Gelegentlich sind Eizellen in pleuraler Flüssigkeit vorhanden.

Strongyloides-Spezies (Hyperinfektion)

Sputum, jegliches aspiriertes Material, durch BAL oder aus drainiertem Material gewonnene Flüssigkeit

Proben sollten so schnell wie möglich untersucht oder für eine spätere Prüfung konserviert werden.

Aktive Larven können in Nativpräparaten gesehen oder fixiert und mit Giemsa gefärbt werden.

Lungenbiopsie

Paragonimus-Spezies

Offene Lungenbiopsie oder perkutane Biopsie, geführt durch Fluoroskopie oder CT

Gewinnung und Aufbewahrung mit sterilen Behältern oder steriler Kochsalzlösung. Fix und Fleck mit Giemsa oder Hämatoxylin-Eosin.

Ova und adulte Egel können identifiziert werden.

Aussehen

Leishmania-Spezies (kutane Leishmaniose)

Biopsie eines nichtulzerierten Bereiches der Läsions- und Berührungspräparate oder Gleitabstriche

Suchen Sie nach Amastigoten in Giemsa-gefärbten Berührungen oder Ausstrichen und in Hämatoxylin-Eosin-gefärbten Biopsien.

Leishmania amastigotes sind morphologisch nicht von denen des Trypanosoma cruzi zu unterscheiden. Leishmania kann aus Hautbiopsien kultiviert werden, aber das Wachstum in vitro kann Wochen dauern.

Molekulare Tests für Leishmania-DNA sind verfügbar.

Onchocerca volvulus

Bei Patienten, die sich in Afrika infiziert haben: Hautbiopsien vom Oberschenkel, Gesäß, oder Beckenkamm

Bei Patienten, die sich in Lateinamerika infiziert haben: Hautbiopsien vom Kopf, Schulterblatt oder Gesäß

Bei Hautbiopsien sollte die Haut mit Alkohol desinfiziert und eine 25-Gauge-Nadel direkt unter der Epidermis eingeführt werden. Diese wird dann angehoben und ein kleines Stück Gewebe mit einem Skalpell herausgeschnitten oder man verwendet ein Einmalinstrument für eine Punchbiopsie. Bei sachgemäßer Durchführung treten kaum wesentliche Blutungen auf. Untersuchen Sie frisch oder fixieren Sie in Methanol und färben Sie mit Giemsa oder Hämatoxylin-Eosin.

Untersuchen Sie die in Kochsalzlösung suspendierte Probe auf bewegliche Mikrofilarien, die aus dem Hautschnitt wandern. Mikrofilarien können in Gewebeschnitten auftreten.

Urogenitale Sekrete oder Biopsie

Schistosoma haematobium, gelegentlich S. japonicum

Frischer Urin oder Biopsie der Harnblase, insbesondere aus der Umgebung des Trigonum

Die empfohlene Zeit für die Urinprobenentnahme ist zwischen 12 und 15 Uhr. Zentrifugation erhöht die Wahrscheinlichkeit des Nachweises.

Ova kann in nassen Halterungen von Urin oder in Biopsieproben aus der Blase gesehen werden.

Trichomonas vaginalis

Tupfer von Vagina-, Zervix-, Harnröhren- oder Prostatasekret in einem Röhrchen mit einer kleinen Menge von steriler Kochsalzlösung.

Nativpräparate sollten innerhalb von 10–15 Minuten nach der Entnahme von Vaginalflüssigkeit untersucht werden, da die Trichomonaden mit der Zeit weniger beweglich werden.

Die Identifizierung motiler Organismen mittels Nativpräparat ist der schnellste, aber weniger sensitive Test. Die Kultur ist sensitiver, dauert aber 5–7 Tage und erfordert eine Inkubation.

Hochsensitive und -spezifische Nukleinsäure-Amplifikationstests, die an Vaginal-, Zervikal-, Urethral- und Urinproben durchgeführt werden, sind ebenfalls verfügbar.